流动相中加入适量四氢呋喃（THF），主要是为了调节洗脱能力、改变选择性、改善峰形或溶解性。它不是所有方法都需要加，一般是在甲醇/乙腈体系分离效果不理想时，用来“微调”方法。

1. 增强流动相洗脱能力

THF 是一种有机溶剂，反相 HPLC 中洗脱能力通常较强。

在反相色谱中，常见有机相洗脱强度大致可理解为：

THF > 乙腈 > 甲醇

加入少量 THF 后，可以使疏水性较强的化合物更容易被洗脱出来，表现为：

保留时间缩短；

后出峰更快洗脱；

分析时间缩短；

强保留杂质不容易长期滞留在柱上。

例如某些疏水性药物、芳香族化合物、脂溶性杂质，用甲醇或乙腈洗脱太慢时，少量 THF 可以明显改善。

2. 改变选择性，提高分离度

THF 不只是“更强的有机相”，它的溶剂性质和甲醇、乙腈不同，因此会改变化合物在固定相和流动相之间的分配行为。

它可能影响：

芳香环化合物的保留；

疏水相互作用；

偶极相互作用；

π-π 作用；

氢键相关作用；

某些异构体或结构相近杂质的相对保留。

所以加入 THF 后，有时会出现：

原来重叠的两个峰分开；

峰顺序发生变化；

某些杂质峰与主峰分离度提高；

原来乙腈/水、甲醇/水体系分不开的杂质变得可分。

这也是方法开发中加入 THF 最重要的原因之一：改变选择性，而不仅仅是缩短保留时间。

3. 改善峰形

某些化合物在常规流动相中可能出现：

拖尾；

峰宽；

峰分裂；

保留过强；

柱上吸附；

溶解性不足导致峰形异常。

加入少量 THF 有时可以改善这些问题，尤其是对一些：

疏水性强的化合物；

芳香性强的化合物；

容易与固定相发生较强相互作用的化合物；

在甲醇/乙腈体系中溶解性不好的样品。

不过峰形改善并不一定总是发生，有些体系中 THF 也可能导致峰形变差，需要实验验证。

4. 改善样品或杂质的溶解性

THF 对很多有机化合物溶解能力较强，尤其是一些疏水性、脂溶性或聚合物相关物质。

加入 THF 后可能有助于：

防止样品析出；

减少柱头沉积；

改善进样重复性；

洗脱强吸附杂质；

提高疏水杂质回收率。

但样品溶剂中 THF 含量过高时，也可能因为溶剂强度太大导致峰前伸或变宽，所以进样溶剂还要与初始流动相匹配。

5. 降低某些流动相体系的黏度和柱压

与甲醇相比，THF/水体系在某些比例下黏度较低，可能降低柱压。

但实际柱压还与比例、温度、柱子规格有关，不能简单认为加 THF 一定降压。

6. 常见加入比例

THF 通常不是大量加入，而是作为第三有机溶剂少量使用。

常见比例例如：

1%；

2%；

3%；

5%；

10%。

很多方法中只是加入 少量 THF 来调节选择性，例如：

乙腈-水-THF

甲醇-水-THF

缓冲盐水溶液-乙腈-THF

具体比例要通过分离度、保留时间、柱压和峰形来优化。

7. 使用 THF 的注意事项

1. UV 截止波长较高

THF 的 UV 截止波长大约在 212 nm 左右，且不同品质、稳定剂和氧化程度会影响背景吸收。

如果检测波长很低，例如：

200 nm；

205 nm；

210 nm；

使用 THF 可能导致：

基线噪声升高；

背景吸收增加；

梯度洗脱时基线漂移；

灵敏度下降。

所以低波长 UV 检测时要谨慎。

2. 容易氧化生成过氧化物

THF 长时间接触空气和光照，可能形成过氧化物，存在安全隐患，也可能影响基线和柱寿命。

因此应注意：

使用 HPLC 级 THF；

避光保存；

开瓶后尽快使用；

不使用长期存放、颜色异?；蚶丛床幻鞯?THF；

必要时检测过氧化物。

3. 对某些材料不兼容

THF 对部分塑料、密封件、管路材料有溶胀或溶解作用。

使用前要确认系统兼容性，尤其是：

PEEK 管路；

某些密封圈；

某些塑料接头；

某些在线过滤器材质。

一般不锈钢系统更耐受，但仍应查看仪器和柱子的说明书。

4. 不是所有色谱柱都适合 THF

多数普通硅胶基 C18 柱可以短期或适量使用 THF，但仍应看说明书。

特别要注意：

手性柱，尤其涂覆型多糖手性柱，THF 可能破坏涂覆层；

聚合物基质柱，溶胀风险不同；

SEC/GPC 柱，溶剂兼容性必须严格匹配；

氨基柱、特殊键合相柱，也要查兼容性。

5. 与盐类缓冲液混合时要防止析盐

THF 与高盐水相混合时，可能改变盐的溶解度。若缓冲盐浓度较高，可能出现：

析盐；

筛板堵塞；

柱压升高；

管路堵塞。

所以加入 THF 的体系中，缓冲盐浓度不宜太高，流动相配好后应观察是否澄清，必要时过滤。

8. 简单总结

流动相中加入适量 THF，主要作用是：

增强洗脱能力，缩短强保留化合物的保留时间；

改变色谱选择性，提高某些相近杂质或异构体的分离度；

改善疏水性化合物的峰形和溶解性；

帮助洗脱强吸附或脂溶性杂质。

但 THF 也有缺点：低波长背景吸收较高、易氧化、对部分材料和特殊色谱柱不兼容、可能导致析盐或基线漂移。因此它通常作为方法优化中的辅助有机相，比例不宜盲目增加，最好结合柱说明书和系统兼容性来使用。